中科光华（西安）智能生物科技有限公司
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陕西 西安市 长安区
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试剂、抗体、技术服务、实验室仪器 / 设备
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生产厂商 科研机构
公司新闻/正文
在染色中有时染料没有被组织的所有部分摄取
人阅读 发布时间：2021-10-22 16:39
这种事关选择性的问题是组织化学的基础，即使是常规的组织染色，如苏木静和伊红（HE) 区分细胞核和细胞质。哪些因素控制选择性呢？
结合位点的数量和亲和力：染料-组织的亲和力和组织中结合位点的数量都可以有很大不同。例如， 苏丹染料对脂肪具有高亲和力，但对周围水合蛋白质亲和力低。在形成共价键的染色系统中，试剂产生的有色产物仅局限T组织化学试剂基团。例如，Feulgen核技术中的酸水解-希夫试剂序列仅与DNA产生红色衍生物。要理解染色系统，就要考虑亲和力的模式。考虑一下传统的酸性染料-碱性染料配对，带负电荷的酸性染料对带阳离子电荷可渗透（蛋白质，在酸性条件下）的组织结构具有高亲和力，但对带阴离子电荷（富于流酸多糖或在磷化核酸中）的组织结构具有低亲和力，碱性染料的情况则相反。这样就产生了细胞质与细胞核的双色染色模式。实验染色条件能够使选择性亲和力最大化。在上面的例子中，pH非常重要，碱性染料适用于中性或酸性溶剂，因为在碱性条件下蛋白质带一个总的负电荷， 因此也与碱性染料结合。亲和力也受无机盐浓度的影响。例如，各种铝-苏木静可因无机盐含量不同而 有所区别。临界电解质的浓度方法学和其他几个实验程序是基于控制电解质含量。然而，即使染料-组织亲和力和染料-结合位点的数黾是相同的，区分两种结构的染色仍有可能发生，这是因为试剂的吸收率，或后继的反应速度，或试剂或产物损失速度在这两种结构中可能是不同的。
1.试剂吸收速度：渐进性染色方法是受速度控制的，例如，用阿新蓝或胶体铁进行的黏液染色。选择性需要短时间染色，在这个过程中仅需快染黏液产生的颜色如果染色时间延长，其他嗜碱性物质也产生染色。
反应速度：应用反应试剂选择性染色，产生有色衍生物，这个过程可能取决于不同的反应速度。例如，过典酸可以氧化组织中的不同物质。然而，在组织化学中应用PAS染色，很短的氧化时间会限制随后多糖的1, 2-二醇基团的快速反应着色。酶组织化学中也有选择性阻断控制反砬速度的例子。当低 pH下进行孵育时，在含有酸性磷酸酶的组织中，有机磷酸盐的水解是迅速的；而在含有碱性磷酸酶的组织中，pH高时，水解速度是慢的。
试剂损失速度：分色或褪色染色可使组织中染料选择性脱离。许多染色方法利用此点，如用铁-苏木素进行肌横纹和用勒克司光蓝进行髓鞘染色。在这种方法中，最初非选择性染色是在溶剂的提取之后。染料首先从渗透的结构（如胶原纤维）中损失。相对不渗透的结构（诸如肌肉中A和Z带以及髓鞘）染色保留时间最长。在每个不同的方法中，试剂损失的速度控制是至关重要的。如神经纤维的银染色。在浸渍这一步中，离子与许多组织基团非选择性结合。然后，用可将离子还原为银金厲的还原剂处 理组织。这种还原剂作用速度至关虽要。如果还原速度太快，因为试剂高浓度或高反应性，银颗粒非选择性沉积于整个组织。如果还原太慢，不会染色，因为大多数银离子在还原前就会弥散到溶剂中。当银离子从背景中迅速弥漫时，就发生了选择性染色，银离子被保留在渗透性弱的组织实体（如神经纤维、 核仁、红细胞）中，并且随后在那里被还原。这种控制速度的方法会受到许多技术人工假象的闲扰。任何影响试剂损失速度的因素（如切片厚度变化、温度、试剂溶液的搅拌、组织中的空洞）都可以改变染色模式。
2.异染性和相关现象：即使一种染料不受选择性的约束，它仍能产生选择性颜色。这种作用来源于染料和反应性染剂。例如，碱性染料（如亚甲基蓝和甲本胺蓝）被组织中不同碱性底物所吸收。同时，染色质正染色为蓝色，软骨瑤质、肥大细胞颗粒和黏蛋白异染色为红紫色。
结合位点的数量和亲和力：染料-组织的亲和力和组织中结合位点的数量都可以有很大不同。例如， 苏丹染料对脂肪具有高亲和力，但对周围水合蛋白质亲和力低。在形成共价键的染色系统中，试剂产生的有色产物仅局限T组织化学试剂基团。例如，Feulgen核技术中的酸水解-希夫试剂序列仅与DNA产生红色衍生物。要理解染色系统，就要考虑亲和力的模式。考虑一下传统的酸性染料-碱性染料配对，带负电荷的酸性染料对带阳离子电荷可渗透（蛋白质，在酸性条件下）的组织结构具有高亲和力，但对带阴离子电荷（富于流酸多糖或在磷化核酸中）的组织结构具有低亲和力，碱性染料的情况则相反。这样就产生了细胞质与细胞核的双色染色模式。实验染色条件能够使选择性亲和力最大化。在上面的例子中，pH非常重要，碱性染料适用于中性或酸性溶剂，因为在碱性条件下蛋白质带一个总的负电荷， 因此也与碱性染料结合。亲和力也受无机盐浓度的影响。例如，各种铝-苏木静可因无机盐含量不同而 有所区别。临界电解质的浓度方法学和其他几个实验程序是基于控制电解质含量。然而，即使染料-组织亲和力和染料-结合位点的数黾是相同的，区分两种结构的染色仍有可能发生，这是因为试剂的吸收率，或后继的反应速度，或试剂或产物损失速度在这两种结构中可能是不同的。
1.试剂吸收速度：渐进性染色方法是受速度控制的，例如，用阿新蓝或胶体铁进行的黏液染色。选择性需要短时间染色，在这个过程中仅需快染黏液产生的颜色如果染色时间延长，其他嗜碱性物质也产生染色。
反应速度：应用反应试剂选择性染色，产生有色衍生物，这个过程可能取决于不同的反应速度。例如，过典酸可以氧化组织中的不同物质。然而，在组织化学中应用PAS染色，很短的氧化时间会限制随后多糖的1, 2-二醇基团的快速反应着色。酶组织化学中也有选择性阻断控制反砬速度的例子。当低 pH下进行孵育时，在含有酸性磷酸酶的组织中，有机磷酸盐的水解是迅速的；而在含有碱性磷酸酶的组织中，pH高时，水解速度是慢的。
试剂损失速度：分色或褪色染色可使组织中染料选择性脱离。许多染色方法利用此点，如用铁-苏木素进行肌横纹和用勒克司光蓝进行髓鞘染色。在这种方法中，最初非选择性染色是在溶剂的提取之后。染料首先从渗透的结构（如胶原纤维）中损失。相对不渗透的结构（诸如肌肉中A和Z带以及髓鞘）染色保留时间最长。在每个不同的方法中，试剂损失的速度控制是至关重要的。如神经纤维的银染色。在浸渍这一步中，离子与许多组织基团非选择性结合。然后，用可将离子还原为银金厲的还原剂处 理组织。这种还原剂作用速度至关虽要。如果还原速度太快，因为试剂高浓度或高反应性，银颗粒非选择性沉积于整个组织。如果还原太慢，不会染色，因为大多数银离子在还原前就会弥散到溶剂中。当银离子从背景中迅速弥漫时，就发生了选择性染色，银离子被保留在渗透性弱的组织实体（如神经纤维、 核仁、红细胞）中，并且随后在那里被还原。这种控制速度的方法会受到许多技术人工假象的闲扰。任何影响试剂损失速度的因素（如切片厚度变化、温度、试剂溶液的搅拌、组织中的空洞）都可以改变染色模式。
2.异染性和相关现象：即使一种染料不受选择性的约束，它仍能产生选择性颜色。这种作用来源于染料和反应性染剂。例如，碱性染料（如亚甲基蓝和甲本胺蓝）被组织中不同碱性底物所吸收。同时，染色质正染色为蓝色，软骨瑤质、肥大细胞颗粒和黏蛋白异染色为红紫色。
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