中科光华（西安）智能生物科技有限公司
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姜欣
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陕西 西安市 长安区
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试剂、抗体、技术服务、实验室仪器 / 设备
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特殊染色的效果都受哪些因素的影响？
人阅读 发布时间：2021-12-24 12:38
在病理形态学的范畴里，组织切片染色技术是方法学中的一个重要组成部分。通常用的最普通的苏木素伊红染色，染色剂和操作技术都比较简单，只要组织新鲜，严格制片操作步骤，作出满意的HE染色切片来，是不会办不到的。与常规染色相对的特殊染色，在病理诊断观察中，应用较为广泛。但是， 就我国目前各地的一些病理试验室，且未能把此项工作做得都满意。下面谈一谈影响特殊染色结果的几个因素，供大家参考。
1.染色的温度关系：温度指的是染料试剂对呈色物所需温度，温度升高，呈色及反应速度加快， 着染力迅速。相反的温度降低，呈色及反应速度减慢。而且在特染技术操作中，是在常温下进行，不需要温度过高。温度升高虽然加快了着染力，但对下步分化步骤，造成不易掌握，甚至染色失败。当然， 温度太低，切片不易浸染。所以染料试剂的温度掌握要适宜，才妥当。影响染色的温度因素有两条：一是实验室温度过低或过高（特别南方天气变化较大）；二是有的试剂在冰箱保存，所设计的温度本身对染色的影响。纠正的方法: 室温低应在温箱中进行，室温高一是减少染色的时间，另外采用自来水降至所需要的温度。
2. 染料试剂的浓度：根据实验结果，采用浓度较稀，作用较弱的染色溶液，组织切片经过较长时间的浸染，可以得到十分满意的染色效果。有些组织切片着色极为困难，则可采用浓度较高的染剂，就能提高染色的效果。
3. 染色时间：染色时间一般包括媒染、浸染、分化等时间的掌握分寸。染色时间太短，就根据染剂对组织的染色作用，室温条件，切片厚薄，固定剂的类别和染色液的新旧等而有所变异，分化步骤应根据染液的浓度，温度，浸染时间及分化液的性能来加以变更。分化失当，自然会引起染色的不匀，过淡或过深等现象。如Mallory三色和PTH染色法，它们的关键步骤均是加强媒染作用。Mallory三色法: 采用切片5um厚，染前须在室温下二次固定于Zenker液内3小时，（或37℃温箱内15〜20分钟），流水冲洗0.5小时，再进行脱汞后，入Mallory液内20分钟，直接用95%乙醇分化1~2次（一片一片进行），即可获满意的结果。PTH染色法，系采用横纹肌组织，切片5pm厚，染前于Zenker液固定2小时，后冲水0.5小时，再行脱汞等处理后，入磷钨酸苏木素2小时（以上均在室温条件），后直接用95%乙醇处理同上法，即可获理想结果（必要时在镜下控制）。
4. 染色剂与pH：染色剂的PH与染色作用有密切的关系。特别是中性染料瑞氏染液及姬姆萨染液, 这两种染色的适宜pH范围均在6. 5~7.0之间，蓝与红的当色才能适中。又如不同电介质浓度的阿新蓝法，可区别多种黏蛋白，特别在镀银、镀金等PH尤为重要。因此染料要纯净，配制要准确，一切染色用具要清洁。否则导致染色失败。当然，不仅染液的PH关系重要，而且组织固定剂的PH也不能忽略。向长久保存于甲醛中的组织，不但特殊染色不佳，同时HE染色也得不到好的结果。这是因为长期固定甲醛，能氧化生成甲酸后变酸性之故。因此要全面考虑。
1.染色的温度关系：温度指的是染料试剂对呈色物所需温度，温度升高，呈色及反应速度加快， 着染力迅速。相反的温度降低，呈色及反应速度减慢。而且在特染技术操作中，是在常温下进行，不需要温度过高。温度升高虽然加快了着染力，但对下步分化步骤，造成不易掌握，甚至染色失败。当然， 温度太低，切片不易浸染。所以染料试剂的温度掌握要适宜，才妥当。影响染色的温度因素有两条：一是实验室温度过低或过高（特别南方天气变化较大）；二是有的试剂在冰箱保存，所设计的温度本身对染色的影响。纠正的方法: 室温低应在温箱中进行，室温高一是减少染色的时间，另外采用自来水降至所需要的温度。
2. 染料试剂的浓度：根据实验结果，采用浓度较稀，作用较弱的染色溶液，组织切片经过较长时间的浸染，可以得到十分满意的染色效果。有些组织切片着色极为困难，则可采用浓度较高的染剂，就能提高染色的效果。
3. 染色时间：染色时间一般包括媒染、浸染、分化等时间的掌握分寸。染色时间太短，就根据染剂对组织的染色作用，室温条件，切片厚薄，固定剂的类别和染色液的新旧等而有所变异，分化步骤应根据染液的浓度，温度，浸染时间及分化液的性能来加以变更。分化失当，自然会引起染色的不匀，过淡或过深等现象。如Mallory三色和PTH染色法，它们的关键步骤均是加强媒染作用。Mallory三色法: 采用切片5um厚，染前须在室温下二次固定于Zenker液内3小时，（或37℃温箱内15〜20分钟），流水冲洗0.5小时，再进行脱汞后，入Mallory液内20分钟，直接用95%乙醇分化1~2次（一片一片进行），即可获满意的结果。PTH染色法，系采用横纹肌组织，切片5pm厚，染前于Zenker液固定2小时，后冲水0.5小时，再行脱汞等处理后，入磷钨酸苏木素2小时（以上均在室温条件），后直接用95%乙醇处理同上法，即可获理想结果（必要时在镜下控制）。
4. 染色剂与pH：染色剂的PH与染色作用有密切的关系。特别是中性染料瑞氏染液及姬姆萨染液, 这两种染色的适宜pH范围均在6. 5~7.0之间，蓝与红的当色才能适中。又如不同电介质浓度的阿新蓝法，可区别多种黏蛋白，特别在镀银、镀金等PH尤为重要。因此染料要纯净，配制要准确，一切染色用具要清洁。否则导致染色失败。当然，不仅染液的PH关系重要，而且组织固定剂的PH也不能忽略。向长久保存于甲醛中的组织，不但特殊染色不佳，同时HE染色也得不到好的结果。这是因为长期固定甲醛，能氧化生成甲酸后变酸性之故。因此要全面考虑。
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