在内分泌组织的病理诊断和研究中,由于常规的HE染色不能够很好的显示垂体、肾上腺的组织形态,经常需要对垂体、肾上腺进行特殊染色以显示各组织学形态。垂体特染方法很多,但试剂配制繁琐,染色步骤多,而肾上腺的特殊染色则通常需要用特殊固定液对组织进行早期固定,因此用Azan改 良方法对垂体及肾上腺进行染色能很好显示腺垂体和神经垂体各类细胞的组织形态,同时还能淸晰显示肾上腺各部分的组织形态,此方法有步骤少、细胞形态清晰、容易诊断等优点,该方法操作方便容易掌握。
实验方法:
1. 肾上腺、垂体组织固定于FineFIX固定液中,常规组织脱水、包埋、切片厚2~3μm。
2. 试剂配制:
① 0.1%偶氮卡红G:偶氮卡红G 0.1g+乙酸1ml+蒸馏水100ml
② 0.7%橘黄G:橘黄G 0.75g+蒸馏水100ml+使用前每2ml+2μl乙酸
③ 0.4%苯胺蓝溶液:苯胺蓝0.4g+冰乙酸8ml+蒸馏水100ml
④ 0.5%磷钨酸:磷钨酸5g+蒸馏水100ml
3. 染色步骤:
① 石蜡切片常规入水,水洗。
② 蒸馏水洗3次,20秒/次。
③ 0.75%橘黄G 15分钟。
④ 水洗。
⑤ 0.1%偶氮卡红G 25 ~ 30分钟,室温(肾脏室温60分钟)。
⑥ 蒸馏水洗3次,20秒/次3
⑦ 鱗钨酸水溶液1小时。
⑧ 蒸馏水洗3次,20秒/次。
⑨ 苯胺蓝25分钟。夏天时间可相应缩短。
⑩ 95%乙醇快过,无水乙醇脱水,二甲本透明封固。
4. 结果显示:
① 垂体嗜酸性细胞胞质呈橘红色、嗜碱性细胞胞质呈湖蓝色,细胞胞质透明不着色、纤维结缔组织呈蓝色、血细胞呈橘黄色。
② 肾上腺球状带胶原纤维丰富蓝染明显,束状带细胞质内脂滴清晰,毛细血管呈橘黄色。髓质细胞被染成深浅不一的髓质细胞团。
5. 技术要领:
① 如果是垂体和肾上腺组织的染色,切片薄切效果更好,不需经过媒染,偶氮卡红室温25~30分 钟即可。
② 如果染色时间过长,即使加长磷钨酸的分化时间也不