在日常外检工作中，病理科经常遇到钙化、骨化标本或骨肿瘤标本。由于该组织里存在钙盐，妨碍用常规方法制作良好切片。骨组织及钙化病灶，经过固定后，必先将钙盐除去使组织软化，才能进行常规切片。如脱钙不全则切片易撕开或碎裂并损伤切片刀刃。脱去钙盐的过程，称为脱钙。为更好地制作出优良的病理切片，现将组织脱钙注意事项及脱钙步骤等介绍如下，以供病理技术人员在工作中作为参考。

　　一、脱钙时应注意
1. 骨组织固定24h后，锯下不超过0.5mm厚度的薄骨片，再以10%甲全溶液固定后进行脱钙。（未固定的组织在酸性脱钙液中受到损伤比已固定的组织大3倍）。骨组织过厚则需延长脱钙时间，长时间浸于强酸影响切片染色效果。
2. 在不影响诊断条件下，应将骨组织周围的软组织全部剥去。如果切片目的在于观察骨髓病变或骨组织肿瘤，最好除去一部分正常的致密的骨组织，以利于脱钙和制片。
3. 脱钙前最好先将骨组织进行脱脂。
4. 脱钙要彻底，脱水应充分，在脱水过程中，要注意不使其过度硬化。
　　二、脱钙剂
　　优质脱钙剂的标准是：
1.完全脱钙。
2.不损伤组织细胞或纤维。
3.不妨碍以后的染色技术。
4.适当的脱钙速度。
　　硝酸脱钙液
　　硝酸脱钙液是最常用的脱钙剂，用硝酸作脱钙液的缺点是形成亚硝酸而使溶液呈黄色，产生染色即迅速影响脱钙速度，且组织的黄染会妨碍随后的染色反应。在硝酸内加入0.1%尿素可以防止变黄而使之无色，但尿素仅有暂时作用，一旦硝酸显淡黄时需要加入。
　　（1）甲醛-硝酸液（Clayden液）
　　配方：
　　甲全溶液        5ml
　　硝酸(比重1.14）    7.5-15ml
　　蒸馏水  加至     100ml
　　此处方中甲醛可部分地抑制硝酸的浸软作用，这既具有脱钙作用，又具有固定作用，硝酸脱钙迅速，组织不膨胀，掌握好脱钙时间可直接脱水，不影响染色效果。但最好先洗去硝酸。横切人肋骨（5mm)用含7.5%硝酸液于1-2d内脱钙。
　　（2）硝酸水溶液
　　配方：
　　硝酸（用0.1%尿素稳定）   5-10ml
　　蒸馏水  加至       100ml
　　此液用作常规脱钙剂，作用迅速，对组织不膨胀，对细胞的保存和染色比前者更好，能适用多种染色技术，但每日需要更换新鲜溶液，最好早、晚各一次，一般1-3d完成。横切人肋骨（5mm)在12-24h内脱钙。
　　三、脱钙步骤
1. 取材

骨组织固定于10%甲全溶液24h后再锯取厚度约0.5cm骨片。
2. 固定
　　再以10%甲全溶液固定2d。
3. 将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。
4. 流水冲洗24h(除酸）。
5. 进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。
　　四、鉴定脱钙是否彻底
　　确定脱钙“终点”三种方法
1. 最常用的是最简单的方法---针刺
　　如果很容易被刺透，而且不感到阻力时，说明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。
2. 用X线检查
　　看组织内是否仍有钙质。
3. 用化学实验检查
　　取5ml脱钙液用2mol/l的NaOH调整至中性，再加5%草酸钠或草酸铵1ml,液体浑浊表示有钙质。迟至5min仍不浑浊表示脱钙液中不含有钙质。组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用完成。显然，应在每次试验时完全更换，再试验中必须经过2-3h间隔让钙溶解。
　　五、酸的中和
　　脱钙后水洗24h,目的是除去组织中经无机盐浸渍后过多的酸，以免影响染色。在冲洗前应将组织用一种碱处理以使之脱酸呈中性，可用5%硫酸钾或硫酸钠处理过夜。组织直接转移到稀乙醇（70%）内过12-18h换液2次，再继续脱水，经无水乙醇，氯方透明，石蜡包埋，切片，整个过程其酸已全部除去，在多数情况下不仅不膨胀且对染色反应能有所改善。

　　参考文献
　　病理学高级教程 .来茂德主编.2015年.738-740.